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Contacts relatifs à cet article / Benoit Gallet / Christine Moriscot / Daphna Fenel / Guy Schoehn

Contrôle qualité par microscopie électronique

Présentation

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Le service de contrôle qualité par coloration négative permet de :

  • vérifier l’homogénéité d’un échantillon (absence d’agrégats).
  • déterminer, dans certains cas, le degré d’oligomérisation des protéines.
  • analyse d’image et reconstruction 3D de complexes protéiques (collaboration).

Mots clés

Microscopie électronique, coloration négative, homogénéité.

Effectif dédié

  • Daphna Fenel
  • Christine Moriscot
  • Guy Schoehn

Equipement

Microscope électronique FEI Tecnai12 120kV LaB6 avec caméra GATAN Orius 1000
- Calibration du microscope : 1 fois par an
- Calibration de la caméra : 1 fois par semaine

Accessibilité et coûts

Académiques membres du PSB, autres académiques et industriels selon tarifs.

Comment nous contacter ?

ibs-plateforme-em.contact@ibs.fr

Une date vous sera envoyée par mail ainsi qu’une demande d’analyse à remplir et à apporter avec les échantillons.

Echantillons

La taille minimale est de 100 kDa. Il est préférable d’éviter la présence de détergent et de glycérol.

La quantité minimum à fournir est de 30 microlitres d’échantillon à environ 0,2 mg/ml et 100 microlitres de tampon pour diluer. Les échantillons sont stockés 2 semaines.

Les échantillons doivent être purs : le demandeur doit apporter la photo d’un gel SDS-PAGE montrant la pureté de l’échantillon protéique à analyser.

Les échantillons doivent respecter le niveau de sécurité L1 ou L2 (à condition d’avoir été préalablement fixés) et être conformes à la déclaration OGM correspondante.

Procédure

Après préparation de la grille par coloration négative (technique de « flottaison » de carbone ou coloration sur grilles carbonées), 5 champs différents répartis sur la grille sont observés. Au minimum 10 photos sont prises pour représenter l’échantillon. Le grandissement peut varier de 10000x à 60000x suivant l’échantillon (sauf cas particulier).

Résultats

Après observation, l’expérimentateur envoie un bilan (via le serveur ftp du CEA ou sur le site intranet de l’IBS) contenant les photos les plus représentatives de l’échantillon avec un commentaire validé par le responsable de la plateforme. L’ensemble des images peut être mis à disposition sur demande.

Le délai d’obtention du bilan est de trois semaines maximum à partir de la réception des échantillons (sauf dans le cas d’une panne de l’instrument).

Stockage des données

Les données sont stockées 3 ans.

Suivi valorisation

Si vous utilisez ces résultats (dans le cadre de la plateforme ou d’une collaboration) merci de rajouter :

- Dans vos remerciements :

« This work used the platforms of the Grenoble Instruct centre (ISBG ; UMS 3518 CNRS-CEA-UJF-EMBL) with support from FRISBI (ANR-10-INSB-05-02) and GRAL (ANR-10-LABX-49-01) within the Grenoble Partnership for Structural Biology (PSB) »

- Dans vos publications :
FENEL Daphna2,3,4
MORISCOT Christine1,2,3,4
SCHOEHN Guy1,2,3,4
 
1Unit for Virus Host Cell Interactions, UMI 3265 (CNRS-EMBL-UJF) 6, rue Jules Horowitz BP 181 F38042 Grenoble France
2CEA, Institut de Biologie Structurale Jean-Pierre Ebel, UMR5075 Grenoble France.
3CNRS, Institut de Biologie Structurale Jean-Pierre Ebel, UMR5075 Grenoble France.
4Université Joseph Fourier, Institut de Biologie Structurale Jean-Pierre Ebel, UMR5075 Grenoble France.

Merci de préciser par mail les références de l’article dans lequel la plateforme est remerciée.
 

Localisation

IBS, rez de chaussée, groupe Microscopie Electronique et Méthodes.

Démarche qualité

La plateforme a été certifiée ISO9001 version 2008 en juin 2011.