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Institut de Biologie StructuraleGrenoble / France

Contacts relatifs à cet article / NEUMANN Emmanuelle

Présentation de la plateforme de MET

La microscopie électronique en biologie structurale

La coloration négative
Cette technique, simple et rapide, permet la visualisation directe de protéines à partir d’une certaine taille (50-100 kDa). L’enrobage de ces protéines avec un sel d’atomes lourds génère des images avec un contraste élevé. Ces images fournissent des informations structurales provenant seulement de la surface de l’objet, mais la technique de coloration négative reste incontournable pour effectuer des vérifications sur l’état d’un échantillon avant son observation en cryo-microscopie électronique. Cette technique permet également de contrôler la qualité (homogénéité) d’un échantillon en vue de sa cristallisation.

La cryo-microscopie électronique et l’analyse d’images
Cette technique permet de s’affranchir de la présence de colorant ou de fixateur chimique, respectant ainsi mieux la structure de l’objet. Plus lourde à mettre en oeuvre que la technique de coloration négative, elle consiste à congeler très rapidement dans de l’éthane liquide des échantillons hydratés de façon à les figer dans une glace amorphe (vitrification). Contrairement à la coloration négative, cette méthode n’utilise aucun additif ce qui préserve l’état natif de l’échantillon tout en permettant d’accéder à sa structure interne.
Les images obtenues sont des projections de toute l’épaisseur de l’échantillon mais ne possèdent cependant qu’un contraste très faible : l’ analyse d’images est alors indispensable. Le principe général consiste dans un premier temps à additionner des images de faible contraste afin de moyenner le bruit présent et d’obtenir un meilleur rapport signal sur bruit. Dans un deuxième temps, ces moyennes qui représentent des vues de l’échantillon sous différents angles peuvent être combinées de manière mathématique pour calculer la structure tridimensionnelle de l’objet de départ.
L’objectif est d’identifier les interactions moléculaires présentes au sein de ces complexes ainsi que leurs implications biologiques.

La plateforme propose trois types de prestations  : JPEG
- Contrôle qualité (coloration négative)
- Cryo-microscopie électronique
- Microscopie électronique cellulaire

- La plateforme propose également la mise à disposition de ses équipements suivant certaines conditions.

- Des collaborations scientifiques peuvent être mises en place pour répondre à des demandes précises nécessitant des développements spécifiques ou une expertise pointue.

Mots clés

Coloration négative, cryo-microscopie électronique, tomographie, microscopie électronique cellulaire, microscopie corrélative (CLEM).

Equipements

Microscopes électroniques en transmission  :

Instruments pour la préparation d’échantillons cellulaires :

  • Automate de cryo-fixation sous haute pression Leica EM-HPM100
  • Automate de cryo-préparation Leica EM-AFS2 + EM-FSP
  • (Cryo-)ultra-microtome Leica EM-UC7 + EM-FC7
  • Automate d’immuno-marquage Leica EM-IGL

Suivi valorisation

Si vous utilisez des résultats (dans le cadre de l’utilisation de la plateforme ou d’une collaboration) merci de spécifier dans vos remerciements :

« This work used the EM facilities at the Grenoble Instruct-ERIC Center (ISBG ; UMS 3518 CNRS CEA-UGA-EMBL) with support from the French Infrastructure for Integrated Structural Biology (FRISBI ; ANR-10-INSB-05-02) and GRAL, a project of the University Grenoble Alpes graduate school (Ecoles Universitaires de Recherche) CBH-EUR-GS (ANR-17-EURE-0003) within the Grenoble Partnership for Structural Biology. The IBS Electron Microscope facility is supported by the Auvergne Rhône-Alpes Region, the Fonds Feder, the Fondation pour la Recherche Médicale and GIS-IBiSA. »

Accessibilité et coûts

Académiques membres du PSB, autres académiques et industriels selon tarifs.

Comment nous contacter ?

ibs-plateforme-em.contact@ibs.fr

Localisation

IBS, rez de chaussée et premier étage, groupe Microscopie Electronique et Méthodes.

Démarche qualité

La plateforme est certifiée ISO9001-NFX 50-900.