Ce projet, mené par Philippe Frachet, Pascale Tacnet, and Quentin Depeyre (doctorant à l’UGA) et en collaboration avec les autres membres de l’équipe PIXEL vise à étudier certains complexes moléculaires impliqués dans l’interaction entre un macrophage et ses cibles potentielles, telles que les cellules apoptotiques et les cellules cancéreuses.
Nous nous intéressons particulièrement au point de contrôle immunitaire CD47-SIRPα, qui joue un rôle clé dans la régulation de la phagocytose. Nos recherches portent sur l’influence du cholestérol membranaire dans ce mécanisme.
Pour cela, nous nous appuyons sur :
• Le développement de sondes protéiques recombinantes, notamment des protéines fluorescentes photovertibles, permettant l’imagerie haute résolution du cholestérol membranaire
• La microscopie confocale et de super-résolution (dSTORM, PALM et sptPALM),
• Une approche dynamique pour analyser, à l’échelle nanométrique, l’organisation de des contacts entre le macrophage et sa cible au cours de la phagocytose (synapse phagocytaire).
Cette étude s’inscrit dans la continuité de nos travaux précédents sur la clairance des cellules apoptotiques (efferocytose) et bénéficie d’une collaboration étroite avec l’équipe d’Arnaud Millet (Mécanobiologie, Immunité et Cancer) à l’IAB- Grenoble.
Au-delà de la caractérisation de la synapse phagocytaire, l’un des objectifs est d’explorer de nouvelles stratégies thérapeutiques anticancéreuses ciblant CD47-SIRPα.
Principales méthodes utilisées : Biologie cellulaire : culture de cellules eucaryotes, test de phagocytose, cytométrie en flux, microscopie à fluorescence. Production de protéines fluorescentes photoconvertibles recombinantes.
Résultats représentatifs : (A) Suivi de particules uniques (SPT) de CD47 à la surface d’une cellule HeLa apoptotique. CD47 est détecté à l’aide d’un anticorps anti-CD47 conjugué à l’AF647, puis imagé en microscopie TIRF PALM/STORM sous une faible puissance laser. Les trajectoires des molécules sont reconstruites et les distances moyennes de saut (Mean Jump Distance, MJD) sont représentées par un code couleur (plateforme d’imagerie de l’IBS). (B) Double détection en STORM de CD47 et de la fixation de SIRPα soluble à la surface d’une cellule en apoptose. Les résultats montrent que SIRPα ne se fixe pas aux corps apoptotiques, caractérisés par une faible teneur en cholestérol. L’image en contraste de phase (BF) correspondante est présentée à droite. Échelle : 10 µm. Données issues de Dufour et al., Communication Biology, 2023.
References
Nanoscale imaging of CD47 informs how plasma membrane modifications shape apoptotic cell recognition. Samy Dufour, Pascale Tacnet-Delorme, Jean-Philippe Kleman, Oleksandr Glushonkov, Nicole Thielens, Dominique Bourgeois & Philippe Frachet Communication Biology (2023)6:207 | https://doi.org/10.1038/s42003-023-04558-y | www.nature.com/commsbio
Calreticulin Release at an Early Stage of Death Modulates the Clearance by Macrophages of Apoptotic Cells. Osman, R. ; Tacnet-Delorme, P. ; Kleman, J.-P. ; Millet, A. ; Frachet, P. Frontiers in Immunology 2017, 8. doi.10.3389/fimmu.2017.01034. Open
Molecular and cellular interactions of scavenger receptor SR-F1 with complement C1q provide insights into its role in the clearance of apoptotic cells Wicker-Planquart, C. ; Dufour, S. ; Tacnet-Delorme, P. ; Bally, I. ; Delneste, Y. ; Frachet, P. ; Housset, D. ; Thielens, N. M. Front. Immunol. 2020, 11. doi. 10.3389/fimmu.2020.00544. Open
Proteinase 3 Interferes With C1q-Mediated Clearance of Apoptotic Cells. Tacnet-Delorme P ; Gabillet J ; Chatfield S ; Thieblemont N ; Frachet P* ; Witko-Sarsat V. Front Immunol. 2018 April DOI : 10.3389/FIMMU.2018.00818. Open
Relative Contribution of C1q and Apoptotic Cell-Surface Calreticulin to Macrophage Phagocytosis. Verneret M, Tacnet-Delorme P, Osman R, Awad R, Grichine A, Kleman JP, Frachet P*. J Innate Immun. 2014 Feb 15
Role of C1q in efferocytosis and self-tolerance : links with autoimmunity. Book title : Autoimmunity - Pathogenesis of Autoimmune Diseases, Clinical Aspects and Therapy of Specific Autoimmune Diseases (ISBN 978-953-51-4188-4) edited by : Dr. Katerina Chatzidionysiou. Philippe Frachet*, Pascale Tacnet-Delorme, Christine Gaboriaud and Nicole Thielens. Intech 2015 DOI : 10.5772/60519