La microscopie électronique en biologie structurale
La coloration négative
Cette technique, simple et rapide, permet la visualisation directe de protéines à partir d’une certaine taille (50-100 kDa). L’enrobage de ces protéines avec un sel d’atomes lourds génère des images avec un contraste élevé. Même si ces images ne fournissent que des informations structurales de surface de l’objet, la technique de coloration négative reste incontournable pour effectuer des vérifications sur l’état d’un échantillon avant son observation en cryo-microscopie électronique. Cette technique permet également de contrôler la qualité (homogénéité) d’un échantillon en vue de sa cristallisation.
La cryo-microscopie électronique et l’analyse d’images
Cette technique permet de s’affranchir de la présence de colorant ou de fixateur chimique, respectant ainsi mieux la structure de l’objet. Plus lourde à mettre en oeuvre que la technique de coloration négative, elle consiste à congeler très rapidement dans de l’éthane liquide des échantillons hydratés de façon à les figer dans une glace amorphe (vitrification). Contrairement à la coloration négative, cette méthode n’utilise aucun additif ce qui préserve l’état natif de l’échantillon tout en permettant d’accéder à sa structure interne.
Les images obtenues sont des projections de toute l’épaisseur de l’échantillon mais possèdent un contraste faible : l’analyse d’images est alors indispensable. Le principe général consiste dans un premier temps à additionner des images de faible contraste afin d’additionner le signal et de moyenner le bruit présent. On obtient ainsi un meilleur rapport signal sur bruit. Dans un deuxième temps, ces moyennes qui représentent des vues de l’échantillon sous différents angles peuvent être combinées de manière mathématique pour calculer la structure tridimensionnelle de l’objet de départ.
L’objectif est d’identifier les interactions moléculaires présentes au sein de ces complexes ainsi que leurs implications biologiques.
La microscopie électronique à l’IBS
La plateforme propose trois types de prestations :
– Contrôle qualité (coloration négative)
– Cryo-microscopie électronique
Analyse d’échantillons biologiques en conditions natives (vitrification) ; analyse morphologique et/ou reconstruction 3D.
– Microscopie électronique cellulaire
– La plateforme propose également la mise à disposition de ses équipements suivant certaines conditions.
– Des collaborations scientifiques peuvent être mises en place pour répondre à des demandes précises nécessitant des développements spécifiques ou une expertise pointue.
Effectif dédié
Daphna Fenel ; Benoit Gallet ; Christine Moriscot ; Emmanuelle Neumann ; Guy Schoehn ; Lefteris Zarkadas
Equipements
Voir la rubrique : Instruments du groupe.
Suivi valorisation
Si vous utilisez des résultats (dans le cadre de l’utilisation de la plateforme ou d’une collaboration) merci de spécifier dans vos remerciements :
« This work used the EM facilities at the Grenoble Instruct-ERIC Center (ISBG ; UMS 3518 CNRS CEA-UGA-EMBL) with support from the French Infrastructure for Integrated Structural Biology (FRISBI ; ANR-10-INSB-05-02) and GRAL, a project of the University Grenoble Alpes graduate school (Ecoles Universitaires de Recherche) CBH-EUR-GS (ANR-17-EURE-0003) within the Grenoble Partnership for Structural Biology. The IBS Electron Microscope facility is supported by the Auvergne Rhône-Alpes Region, the Fonds Feder, the Fondation pour la Recherche Médicale and GIS-IBiSA. »
Accessibilité et coûts
Académiques membres du PSB, autres académiques et industriels selon tarifs.
Comment nous contacter ?
ibs-plateforme-em.contact@ibs.fr
Localisation
IBS, rez de chaussée et premier étage, Groupe Microscopie Electronique et Méthodes.
Démarche qualité
La plateforme est certifiée ISO9001-NFX 50-900.